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【CEM】微波輔助的肽棕櫚?;禾岣吆铣尚实男虏呗?/h1>

 更新時間:2024-11-01 點擊量:28

一、介紹

本程序詳細(xì)說明了在0.10毫摩爾規(guī)模下,使用Liberty系列自動化微波肽合成儀將棕櫚酸簡單且高效地偶聯(lián)到N端肽上的方法。

請將此文檔與Liberty手冊和安全數(shù)據(jù)表(P/N 601400)一起使用。在操作儀器之前,請閱讀并充分理解所有文檔。

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1. 棕櫚酸


注意

必須采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施,避免接觸試劑或試劑蒸汽。應(yīng)根據(jù)用戶的危險材料安全程序和試劑制造商的安全數(shù)據(jù)表,佩戴相應(yīng)的防護(hù)裝備。請參考這些指南以正確處理和處置試劑。所有廢棄物的處理應(yīng)符合所有適用的國家、地區(qū)的健康與安全法規(guī)。

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2. 棕櫚酸與肽的偶聯(lián)


步驟1:編寫微波方法

創(chuàng)建“90°C 6分鐘偶聯(lián)"微波方法

1. 編輯"選項卡中,選擇微波方法"

2. 選擇以下篩選條件:“0.10"合成規(guī)模和偶聯(lián)"。

3. 通過點擊復(fù)制按鈕,創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)"微波方法的副本。

4. 重命名為“90°C 6分鐘偶聯(lián)"。

5. 編輯“90°C 6分鐘偶聯(lián)"微波方法以使用以下參數(shù)值:

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6. 輸入所有參數(shù)值后,選擇“保存"。


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步驟2:使用編程的微波方法

創(chuàng)建循環(huán)創(chuàng)建“0.10-90°C 6分鐘偶聯(lián)(高膨脹)"循環(huán)編輯器

1. 編輯"選項卡中,選擇循環(huán)"。

2. 選擇以下篩選條件:“0.10"合成規(guī)模、氨基酸"高膨脹"。

3. 通過選中并點擊復(fù)制按鈕,創(chuàng)建“0.10-單偶聯(lián)(高膨脹)"的副本。重命名為“0.10-90°C 6分鐘偶聯(lián)(高膨脹)"

4. 編輯“0.10-90°C 6分鐘偶聯(lián)(高膨脹)"循環(huán),以使用以下循環(huán)步驟和參數(shù)值:

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5.輸入所有循環(huán)步驟和參數(shù)后,選擇“保存"。


步驟3:將循環(huán)應(yīng)用于Liberty方法

1. 編輯"選項卡中,選擇“Liberty方法"以創(chuàng)建新的Liberty方法。

2. 在包含棕櫚酸溶液的位置的N端添加一個值(一個字母代碼)。

3. 編輯Liberty方法,使用以下方法選項:

• C端:根據(jù)樹脂連接子的指示

樹脂類型:根據(jù)需要選擇

樹脂循環(huán):根據(jù)需要選擇

最終脫保護(hù)循環(huán):0.10-無最終脫保護(hù)

4. 在氨基酸循環(huán)網(wǎng)格中,雙擊棕櫚酸偶聯(lián)的位置,并從下拉菜單中選擇“0.10-90°C 6分鐘雙偶聯(lián)"循環(huán)。

5. 選擇保存"并關(guān)閉循環(huán)編輯器。

【CEM】微波輔助的肽棕櫚酰化:提高合成效率的新策略

6. Liberty方法加載到樹脂指示器位置。

7. 為確保準(zhǔn)備足夠的試劑溶液,選擇計算器"選項卡,然后選擇用量計算器"。請參閱步驟4:準(zhǔn)備試劑"以了解重要的試劑制備。

步驟4:準(zhǔn)備試劑

1. DMF中制備0.2 M的棕櫚酸溶液,并將其轉(zhuǎn)移到干凈的干燥離心管中。根據(jù)方法指示將其加載到所需位置。

注意:

如果棕櫚酸溶液不易溶解,請進(jìn)行10分鐘的超聲波處理。

2. 稱量所需的樹脂并轉(zhuǎn)移到干凈的反應(yīng)容器中。將反應(yīng)容器固定在衰減器上,然后放入微波腔中。

3. 準(zhǔn)備任何其他必要的試劑,將其加載到儀器上,并開始Liberty方法。


二、案例研究:α-黑色素細(xì)胞刺激激素(CH3(CH2)14CONH-SYSMEHFRWGKPV-NH2)的自動化棕櫚酰化

肽合成

使用CEM Liberty Blue自動化微波肽合成儀在0.50Rink酰胺ProTide LL樹脂(0.20毫當(dāng)量/克替代度)上以0.1毫摩爾規(guī)模制備了棕櫚?;?/span>α-黑色素細(xì)胞刺激激素CH3(CH2)14CONH-SYSMEHFRWGKPV-NH2(圖3)。脫保護(hù)步驟采用20%哌啶的DMF溶液。偶聯(lián)反應(yīng)使用5倍過量的Fmoc-AA-OH和棕櫚酸,以及1.0 M DICDMF溶液和1.0 M Oxyma PureDMF溶液進(jìn)行。切割使用CEM Razor高通量肽切割系統(tǒng)進(jìn)行,切割溶液為92.5:2.5:2.5:2.5 TFA/H2O/TIS/DODT。切割后,將肽在Et2O中沉淀并冷凍干燥過夜。

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3. 棕櫚?;摩?黑色素細(xì)胞刺激激素


分析

該肽在配備了Acquity UPLC BEH C8柱(1.7 μm,2.1 x 100 mm)的Thermo Scientific Vanquish UPLC系統(tǒng)上進(jìn)行分析,并使用PDA檢測器。UPLC系統(tǒng)連接至Thermo Exactive Plus Orbitrap,用于結(jié)構(gòu)測定。峰分析通過Thermo Chromeleon軟件完成。分離采用梯度洗脫方法,使用0.1% TFA在(i)水中和(ii)乙腈中進(jìn)行。

結(jié)果與結(jié)論

使用Liberty Blue自動化微波肽合成儀進(jìn)行CH3(CH2)14CONH-SYSMEHFRWGKPV-NH2(分子量 = 1861)的微波增強(qiáng)固相肽合成(SPPS),目標(biāo)肽的純度為75%(見圖4和圖5)??偤铣蓵r間為1小時41分鐘,共產(chǎn)生300毫升廢物。

【CEM】微波輔助的肽棕櫚酰化:提高合成效率的新策略

4. CH3(CH2)14CONH-SYSMEHFRWGKPV-NH2UPLC色譜圖

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5. CH3(CH2)14CONH-SYSMEHFRWGKPV-NH2在保留時間5.13分鐘時的質(zhì)譜圖


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